El programa cubano de hiperplasia adrenal congénita (HAC) emplea, para la confirmación y seguimiento de los casos elevados en la pesquisa neonatal, el UMELISA 17OH Progesterona Suero, ensayo que cuantifica los niveles de 17α-hidroxiprogesterona (17OHP) en muestras de suero. El trabajo presenta la evaluación de un anticuerpo monoclonal (AcM) anti-17OHP, obtenido en el Centro de Inmunoensayo, para la sustitución del actual anticuerpo policlonal (AcP) en la fase sólida del ensayo. El estudio de tres controles con diferentes concentraciones de hormona dio como resultado coeficientes de variación intra- e inter-ensayo inferiores al 6%. El ensayo de recuperación, al evaluar tres muestras a las que se adicionaron diferentes cantidades de la hormona, mostró un recobrado medio de 102.1±2.8%.Se obtuvo una baja correlación (r=0,6646) entre ambos ensayos al evaluar 1 715 muestras de suero y el promedio de concentración de 17OHP, así como el porcentaje de elevados obtenidos con las nuevas condiciones de recubrimiento, son inferiores a los resultados alcanzados con la fase sólida sensibilizada con los AcP. Los límites de detección (1.4 ng/mL) y cuantificación (3.6 ng/mL) fueron similares a los reportados para el ensayo actual. Los porcentajes de reactividad cruzada con 23 hormonas fueron inferiores al 6%. El estudio de las características funcionales del UMELISA 17OH Progesterona Suero mostró que la sustitución del AcP en la fase sólida por el AcM no afecta la precisión y la exactitud del ensayo, además que permite contar con un diagnosticador más específico para el diagnóstico de la HAC.